哈藥集團生物疫苗有限公司重組禽流感病毒H5亞型二價滅活疫苗
本試驗為分析免疫質量，及時掌握流行病學動態(tài)和免疫效果，我公司在河北省石家莊市和邢臺市選取兩個蛋雞場，對我公司重組禽流感病毒H5亞型二價滅活疫苗( H5 N1，Re-6株+ Re- 7株)抗體的血清學進行連續(xù)性的監(jiān)測，以此掌握我公司重組禽流感病毒H5亞型二價滅活疫苗( H5 N1，Re-6株+ Re- 7株) 抗體消長規(guī)律、產生時間、抗體高度及持續(xù)時間等效果。
1 材料和方法
1.1 供試材料
哈藥集團生物疫苗有限公司重組禽流感病毒H5亞型二價滅活疫苗( H5 N1，Re-6株+ Re- 7株)滅活疫苗。
抗體監(jiān)測試劑 禽流感H5N1 Re-7株和Re-6株抗原及陽性血清，由中國農業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所提供，紅細胞懸液是哈藥集團生物疫苗有限公司質量管理部提供的SPF級公雞紅血球。
1.2 疫苗效力檢測
取4周齡SPF雞35只（由哈藥集團生物疫苗有限公司SPF雞場提供），分成兩組，一個實驗組，每組20只，對照組15只，實驗組注射哈藥集團生物疫苗有限公司禽流感H5亞型二價滅活疫苗，每只肌肉注射疫苗0.5ml。21日后，實驗組、對照組分別采血，分離血清，分別用國家禽流感參考實驗室提供的針對禽流感病毒Re-6株和Re-7株免疫抗體的2種H5亞型抗原測定HI抗體。
1.3試驗雞群
選擇4周齡未經禽流感疫苗免疫的商品蛋雞（海蘭白）在河北省石家莊(A場)和邢臺市（B場）兩個蛋雞場（15000羽左右），免疫哈藥集團生物疫苗有限公司禽流感H5亞型二價滅活疫苗。雞群在同一管理條件下進行飼養(yǎng)。
1.4 免疫劑量及方法 按照種雞場提供免疫程序，實驗組于4周齡首免，頸部皮下注射0.3 mL／羽；8周齡二免，胸部肌肉注射0.5 mL／羽。
1.5 HI抗體效價測定 雞群于4周齡（首免當天）、6周齡、7周齡、8周齡(二免當天)、9周齡、10周齡、12周齡、14周齡、17周齡、20周齡、23周齡、26周齡，每組隨機選取150只雞翅靜脈采血，離心制備血清并按照國家標準紅細胞血凝抑制試驗( HI )進行抗體檢測。
1.6檢測試劑和檢測方法
試驗均用國家標準紅細胞血凝抑制試驗( HI )進行抗體檢測，待檢血清HI抗體滴度大于或等于6log2時為抗體合格。
2 結果
2.1疫苗效力檢驗結果見表1，對照組為陰性，免疫雞Re-6株、Re- 7株HI抗體幾何平均滴度（GMT）≥6log2為合格產品。
表1 疫苗效力檢測結果（log2）
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|
Re-6株 |
Re-7株 |
|
哈藥生物疫苗 201409 |
6.4 |
6.3 |
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對照組 |
0 |
0 |
2.2 石家莊與邢臺市兩個蛋雞場免疫疫苗后，均未見明顯不良反應，雞群狀態(tài)良好，測定雞群禽流感Re-6株、Re-7株HI抗體效價，并分別計算平均值，結果見表2，繪制抗體消長折線圖，見圖1、圖2。
表2 禽流感H5N1亞型Re-6株及Re-7株HI抗體效價監(jiān)測結果（log2）
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周齡 |
Re-6株（log2） |
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Re-7株（log2） |
||
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A廠組 |
B廠組 |
|
A廠組 |
B廠組 |
|
|
4 |
1.4±1.2 |
1.4±1.1 |
|
1.1±0.88 |
1.1±0.88 |
|
6 |
5.8±1.2 |
6±1.5 |
|
6.4±0.7 |
6.1±1.7 |
|
7 |
7.6±1.6 |
8±1.2 |
|
8.2±1.3 |
8.4±1.6 |
|
8 |
7.4±1.3 |
7.9±1.1 |
|
7.9±1.5 |
7.8±1.9 |
|
9 |
8.2±1.5 |
8±1.2 |
|
8.5±1.6 |
8.4±1.6 |
|
10 |
9.1±2.2 |
9±2.5 |
|
9.5±0.9 |
9±1.7 |
|
12 |
10.3±1.4 |
9.7±1.1 |
|
10.1±1.7 |
9.4±1.5 |
|
14 |
11.6±0.8 |
11±1.8 |
|
11.4±1.2 |
10.9±2.1 |
|
17 |
10.9±2.2 |
11.4±1.2 |
|
11.2±2.3 |
11.3±0.9 |
|
20 |
10.3±2.6 |
10±1.3 |
|
10±1.2 |
9.5±1.6 |
|
23 |
7.6±1.7 |
7±1.5 |
|
7.7±2.3 |
6.9±2.2 |
|
26 |
6±2.4 |
5.7±1.7 |
|
6.3±1.4 |
5.9±1.8 |
由圖1、圖2可見，四周齡雛雞禽流感母源抗體為零或極低，首免后2周，A場組、B場組Re-6株、Re-7株抗體效價達到6log2，3周各組均達到首免后的抗體高峰，Re-6株抗體6.9~8log2，Re-7株抗體8~8.4log2。首免高峰后抗體效價出現下降趨勢，于8周齡二免后，三個實驗組抗體效價迅速上升，其中A場組抗體效價上升速度最快，6周后（14周齡）達到二免抗體高峰且峰值最高，Re-6株抗體達到11.6log2，Re-7株抗體達到11.4log2；B場組抗體上升速度、峰值次之，于二免后9周達到抗體高峰。達到峰值后各實驗組抗體效價平穩(wěn)下降，二免后18周，A場組與B場組Re-6株、Re-7株抗體效價略高于6log2，二免后合格抗體可持續(xù)16~18周。
2.3 抗體顯著性檢驗（t 檢驗）A場與B場采樣點之間差異顯著(P<0.05)，A場與B場差異不顯著（P>0.05）。
3 討論
雞群HI抗體效價幾何平均數達到4log2可判定為免疫合格，據有關資料，HI抗體效價達到4log2時有保護力，但有時能分離到病毒，當達到5log2以上時，可完全保護，并且分離不到病毒。綜合考慮現地實際與滅活疫苗抗體產生規(guī)律，對于商品蛋雞，現地應用中以6log2作為抗體合格值及免疫臨界值為宜。
在現地應用中，個別養(yǎng)殖戶及養(yǎng)殖場不重視禽流感疫苗的免疫，在商品蛋雞開產前僅進行一次或兩次重組禽流感病毒H5亞型二價滅活疫苗( H5 N1，Re-6株+ Re- 7株)免疫，本次試驗由于現地條件限制，僅進行了兩次禽流感疫苗免疫，由實驗數據可看出，商品蛋雞在開產前進行一次免疫，抗體峰值較低且下降較快；若進行兩次免疫，二免合格抗體可持續(xù)16~18周左右，這意味著產蛋雞群在5~6月齡產蛋率上升期及高峰期，HI抗體效價將降至免疫臨界值，如果此時進行加強免疫將對產蛋率產生較大影響。因此根據試驗結果建議商品蛋雞在開產前進行三次H5型禽流感疫苗免疫，15~30日齡進行首免，45~60日齡進行二免，開產前進行三免，按照此程序，合格抗體可較好的保護產蛋高峰期。建議有條件的雞場在產蛋期定期進行禽流感HI抗體監(jiān)測，根據監(jiān)測結果及時進行免疫，同時也應做好H9型禽流感疫苗免疫。
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