針對(duì)客戶在使用哈藥疫苗布氏菌病試管凝集試驗(yàn)抗原產(chǎn)品時(shí)，總是出現(xiàn)不會(huì)操作及操作不當(dāng)?shù)膯?wèn)題，導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果不理想，現(xiàn)整理了布病試管凝集試驗(yàn)的操作過(guò)程，供廣大客戶參考。

一、 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

1、 試管的準(zhǔn)備

① 把試管浸泡于帶有洗滌劑的溫水中30分鐘，浸泡后用試管刷將其刷干凈。先用自來(lái)水沖洗10遍，再用去離子水沖洗1遍。

② 試管沖洗干凈后倒置于籃子中，等水瀝干后置干燥箱中，160℃干燥3個(gè)小時(shí)。

③ 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備0.5%的石炭酸生理鹽水。

2、試劑的準(zhǔn)備

①標(biāo)準(zhǔn)抗原:按照說(shuō)明書(shū)使用。使用時(shí)充分搖勻，用稀釋液作1：20(工作濃度)稀釋。

②標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清凍干品，使用前用蒸餾水溶解至規(guī)定容積。

③標(biāo)準(zhǔn)陰性血清凍干品，使用前用蒸餾水溶解至規(guī)定容積。

3、被檢血清

①按常規(guī)方法采血分離血清

血清必須新鮮，無(wú)明顯蛋白絮凝物、無(wú)溶血和無(wú)腐敗氣味。

②運(yùn)送和保存血清樣品

防止血清凍結(jié)和受熱，以免影響凝集價(jià)。

二、試驗(yàn)操作過(guò)程

1、確定被檢血清的稀釋度

牛、馬、駱駝稀釋用1:50,1：100,1：200,1：400(4個(gè)稀釋度);豬、山羊、綿羊和狗用1：25,1:50,1:100,1:200(4個(gè)稀釋度)。大規(guī)模檢疫時(shí)也可用2個(gè)稀釋度，即牛、馬、駱駝?dòng)?：50,1：100，豬、山羊、綿羊和狗用1:25,1:50,為測(cè)定強(qiáng)陽(yáng)性血清效價(jià)，稀釋度可以增加。

2、稀釋被檢血清—豬、山羊、綿羊和狗血清的稀釋。

①每份被檢血清用4支試管，標(biāo)記檢驗(yàn)編號(hào)后第I管加1.15 mL稀釋液，第2-4管各加人0.5 m L稀釋液。

②取被檢血清0.1 mL，加人第1管，充分混勻后吸棄0.25 mL。

③從第1管中吸取0.5mL加人到第2管，混合均勻后，再?gòu)牡?管吸取0.5 m L至第3管，如此倍比稀釋至第4管，從第4管棄去0.5 mL，稀釋完畢。

④從第1至第4管的血清稀釋度分別為1：12.5,1：25,1：50,1：100。

3、加抗原

將0. 5 m L抗原(1:20)加入已稀釋好的各血清管中，并振搖均勻，豬、羊或狗的血清稀釋則依次變?yōu)? : 25,1 : 50,1 : 100,1：200，牛、馬和駱駝的血清稀釋度則依次變?yōu)?：50,1：100,1：200,1:400。各反應(yīng)管反應(yīng)總量為1 mL。

4、設(shè)立對(duì)照—每次試驗(yàn)都應(yīng)設(shè)立下列對(duì)照。

①陰性血清對(duì)照

陰性血清的稀釋和加抗原的方法與被檢血清同。

②陽(yáng)性血清對(duì)照

陽(yáng)性血清的最高稀釋度應(yīng)超過(guò)其效價(jià)滴度，加抗原的方法與被檢血清同。

③抗原對(duì)照

在0. 5mL稀釋液中，加0.5 m L抗原(1：20)

5、比濁管的配置

每次試驗(yàn)均須配制比濁管，作為判定凝集反應(yīng)程度的依據(jù)，先將抗原(1: 2 0)用等量稀釋液作一倍稀釋?zhuān)�然后按�?配制比濁管。

                                                                            表 1比 濁 管 的 配 制

6、感作（反應(yīng)）

所有試驗(yàn)管充分震蕩后，置37℃溫箱感作20小時(shí)。

7、結(jié)果判斷

確定每份被檢血清效價(jià)：比照比濁管判讀，出現(xiàn)++以上凝集現(xiàn)象的最高血清稀釋度為血清凝集價(jià)。

① 結(jié)果判定

當(dāng)陰性血清對(duì)照和抗原對(duì)照不出現(xiàn)凝集，陽(yáng)性血清的凝集價(jià)達(dá)到其標(biāo)準(zhǔn)效價(jià)士1個(gè)滴度，則證明試驗(yàn)成立，可以判定。否則，試驗(yàn)應(yīng)重做。

②牛、馬和駱駝?dòng)?:100。血清稀釋度，豬、山羊、綿羊和狗于1:50血清稀釋度出現(xiàn)“++”以上的凝集現(xiàn)象時(shí)，被檢血清判定為陽(yáng)性反應(yīng)。

三、試驗(yàn)后的處理

1、試管的處理

把所用試管必須高壓處理（121℃高壓30分鐘），然后用自來(lái)水徹底洗涮干凈，再用去離子水沖洗，后放置框中瀝干，干燥（160℃干燥3個(gè)小時(shí)），保存?zhèn)溆谩?

2、 配置好而未用完的抗原及其盛裝其瓶子的處理

瓶子連其抗原一同高壓滅菌（121℃高壓30分鐘），后清洗干凈以備用。

3、 試管架的處理

把試管架上帶有樣品標(biāo)記的符號(hào)用無(wú)水乙醇徹底清除掉，后用自來(lái)水把試管架沖洗干凈，晾干、保存?zhèn)溆谩?

四、哈藥疫苗布氏菌病試管凝集試驗(yàn)產(chǎn)品

   規(guī)格：

抗原：10 ml/瓶

陽(yáng)性血清：1.0 ml/瓶

陰性血清： 2.0ml/瓶

包裝：

5瓶/盒、10瓶/盒、20瓶/盒。

貯藏與有效期：

抗原2～8℃保存，有效期為18個(gè)月。期滿后測(cè)定效價(jià)，如果符合標(biāo)準(zhǔn)，可延長(zhǎng)6個(gè)月。 

陰、陽(yáng)性血清液體制品2～8℃保存，有效期陽(yáng)性血清為12個(gè)月，陰性血清為24個(gè)月；凍干制品8℃以下保存，有效期均為120個(gè)月。